Аллергопроба с нативным материалом
Кожные аллергопробы (прик, скарификационные) с нативным аллергеном
Диагностика аллергических заболеваний включает ряд последовательных этапов: сбор анамнеза (истории болезни), общее клиническое обследование, специфическую диагностику in vivo (кожные пробы со стандартными диагностическими аллергенами — коммерческими аллергенами, которые доступны на рынке лекарственных средств) и in vitro (определение уровня специфических иммуноглобулинов Е (sIgE) в сыворотке крови). Достоверная аллергодиагностика является основой профилактики и адекватного лечения аллергических заболеваний.
Трудные случаи диагностики немедленной аллергии
Одним из важнейших этапов диагностики аллергии является сопоставление клинической картины и анамнеза заболевания с результатами специфической in vivo и in vitro диагностики. В клинической практике врача-аллерголога часто встречается ситуация, когда эти данные расходятся: врач почти уверен в диагнозе, но результат подтверждающего исследования - отрицательный.
Почему такое возможно?
Причиной расхождения анамнеза болезни и результатов тестирования in vivo и in vitro могут быть так называемые «минорные аллергены», входящие в сложный состав нативных экстрактов, но отсутствующие в стандартных диагностических аллергенах и «невидимые» для лабораторных методов диагностики.
Одной из причин является особенность диагностических аллергенов, полученных различными способами: из различного исходного сырья, с различной степенью очистки, которые могут отличаться друг от друга, что существенно влияет на результаты аллерготестов.
Несовпадение результатов кожных проб и содержания специфических IgE (sIgE) в крови связано с цитофильностью иммуноглобулина Е - sIgE присутствует в крови в низких концентрациях и достаточно быстро «уходит» в ткани, где связан с клетками и сохраняется в таком виде в течение всей жизни клеток (до нескольких месяцев).
Как разрешить проблему?
Точность аллергодиагностики помогает повысить кожная проба (прик- или скарификационный тест) с нативным аллергеном – например, шерстью и перхотью конкретного животного или домашней пылью из конкретной квартиры. Кожные пробы с нативным аллергеном часто оказываются более показательными, чем исследование специфического IgE сыворотки крови или постановка кожной пробы со стандартным диагностическим аллергеном.
Прик-тест с нативным аллергеном — описание метода
Прик-тест с индивидуальным нативным аллергеном проводится с целью диагностики аллергии немедленного типа при отсутствии стандартизированного диагностического аллергена или в случаях расхождения данных анамнеза и результатов диагностики со стандартным аллергеном, а также при подозрении на ложноотрицательный результат in vitro диагностики (sIgE). Метод диагностики состоит из двух этапов: 1) Приготовление стерильного нативного аллергена, 2) Постановка прик-теста и оценка кожной реакции.
Приготовление стерильного нативного аллергена занимает 15 минут:
- Нативный аллерген приносит пациент: шерсть и перхоть животных, домашняя пыль, перья птиц, пищевые продукты и др.
Для приготовления индивидуального диагностического аллергена достаточно 1 - 2 см. куб. (1 - 2 мл) первичного аллергенного сырья.
- Для приготовления используется лабораторная ступка с пестиком и разводящая жидкость для неинфекционных аллергенов.
- Для фильтрации и стерилизации используются стерильные шприцы и стерильный одноразовый индивидуально упакованный гидрофильный шприцевой PVDF-фильтр.
- После фильтрации через PVDF-фильтр полученный экстракт нативного аллергена является стерильным.
Постановка прик-теста и оценка реакции проводится по стандартной методике, представленной здесь - https://viterramed.ru/catalog/allergologija-immunologija/diagnosticeskie-meroprijatija/130104/
Нативные аллергены — «природная» неоднородность состава
Аллергены – это антигены способные вызывать иммунный ответ и сенсибилизацию, которые приводят к развитию аллергической реакции при повторных контактах с этим аллергеном.
Нативным аллергеном принято называть природное сырье (эпителий и перхоть животных, домашняя пыль, пыльца растений, продукты питания и т.д.), из которого путём экстракции получают аллергены для диагностики аллергии (диагностические аллергены). Наиболее часто в клинической практике используют водно-солевые экстракты исходного аллергенного сырья.
Аллергенный состав большинства нативных аллергенов является гетерогенным (неоднородным). Экстракты нативных аллергенов представляют собой сложные белково-полисахаридные комплексы, содержащие не один, а несколько аллергенных компонентов, каждый из которых способен вызвать сенсибилизацию и аллергическую реакцию. Эти аллергенные компоненты делятся на главные (мажорные) и второстепенные (минорные) аллергены. Такое разделение основано на частоте реагирования на эти компоненты лиц с гиперчувствительностью к цельному экстракту. За главные компоненты принимают те, на которые реагируют не менее 50% лиц, имеющих гиперчувствительность к цельному экстракту. Нативный аллерген имеет наиболее полный «природный» компонентный состав, и уже поэтому представляет диагностическую ценность.
О современной номенклатуре аллергенов
Перечень известных аллергенов чрезвычайно широк. Ни одна из существующих классификаций аллергенов не является исчерпывающей. В практике аллергологии широко используется принцип простого разделения аллергенов на эпидермальные, пыльцевые, пищевые, инсектные, грибковые, бытовые, профессиональные, лекарственные и т.д., однако такое разделение весьма условно. Официальная номенклатура аллергенов впервые была опубликована в 1986 году, пересмотрена и унифицирована в 1994 году Номенклатурным субкомитетом по аллергенам при Всемирной Организации Здравоохранения. Современная номенклатура включает около 1000 известных и изученных молекул. Электронная база данных аллергенов постоянно пополняется и обновляется — www.allergen.org . При этом необходимо понимать, что реальное количество окружающих нас аллергенов далеко не исчерпывается этим списком.
Для примера, известно и достаточно изучено (т.е. уже включено в международную номенклатуру аллергенов):
- 76 аллергенных компонентов домашней пыли (House dust mite) - http://allergen.org/search.php?allergensource=House+dust+mite
- 37 аллергенных компонентов пыльцы полыни (Artemisia) - http://allergen.org/search.php?allergensource=Artemisia
- 16 аллергенных компонентов пыльцы амброзии (Ambrosia) - http://allergen.org/search.php?allergensource=Ambrosia
- 18 аллергенных компонентов арахиса (Arachis hypogaea) - http://allergen.org/search.php?allergensource=Arachis
- 8 аллергенных компонентов из перхоти и шерсти кошки - http://allergen.org/search.php?allergensource=Felis+domesticus
- 8 аллергенных компонентов из перхоти и шерсти собаки - http://allergen.org/search.php?allergensource=Canis+familiaris
Почему пробы с нативными аллергенами не теряют диагностической ценности?
Дефицит стандартных диагностических аллергенов
Кожные аллергопробы (прик- и скарификационные тесты) остаются надёжным, простым и недорогим методом выявления немедленной (IgE-опосредованной) аллергии.
Правильное проведение кожных аллергопроб позволяет получить полную и подлинную информацию о спектре сенсибилизации у пациента. Для диагностики аллергии ставятся кожные пробы, прежде всего, со стандартными диагностическими аллергенами. Но в клинической практике в арсенале врача-аллерголога никогда не бывает достаточного спектра стандартных аллергенов. На рынке просто отсутствует их достаточный ассортимент.
Проблема стандартизации диагностических аллергенов
До настоящего времени не существует единой системы стандартизации диагностических аллергенов. Правила стандартизации различаются в США, странах Европы и России. Единицы аллергенной активности могут отличаться у разных производителей: JSK (единицы стандартного качества, Sevapharma), IR (индекс реактивности, Stallergenes Greer), AU (аллергенные единицы, Lofarma), UBE (единицы биологических эквивалентов, IPI-Asac), SQ (стандартизированные единицы, ALK-Abello) и т.д. В России принят стандарт PNU (единицы белкового азота). Несмотря на то, что диагностические аллергены от разных производителей могут быть предназначены для выявления одной и той же аллергии, их нельзя назвать эквивалентными, и они могут показывать разные результаты при их использовании. Известным фактом является то, что разные серии диагностического аллергена домашней пыли (вероятно, из разного нативного сырья) показывали разный результат у одного и того же пациента с бытовой аллергией.
Утрата «природной неоднородности» в результате очистки и стандартизации
Исходное сырьё (нативный аллерген) неоднородно по составу, что затрудняет стандартизацию аллергенов для диагностики. Как правило, аллергены стандартизируют, сравнивая их биологическую активность с «эталонным образцом». Эти «эталонные образцы» могут отличаться по составу и активности не только в разных странах, но и у разных производителей. В результате очистки и удаления второстепенных фракций из нативного аллергена в процессе стандартизации, им может быть утрачена «природная неоднородность» аллергенного состава. Таким образом, стандартизированный диагностический аллерген может содержать меньшее число аллергенных компонентов, чем нативный аллерген. Для повышения диагностической ценности стандартизированных препаратов необходимо использование максимально полноценных по составу аллергенов, а не только их главных компонентов. Оптимальным требованием является получение максимально полного аллергенного состава из аллергенного источника.
Изменчивость аллергенных свойств
Серьёзной проблемой является изменчивость аллергенных свойств. Эти изменения могут возникать, в частности, вследствие взаимодействия природных аллергенов с некоторыми веществами антропогенного происхождения. Были приведены свидетельства в пользу того, что некоторые химические соединения, загрязняющие окружающую среду, могут изменять аллергенные свойства природных аллергенов. Это направление приобретает актуальность в связи с ухудшающейся экологической обстановкой. Изменчивость свойств аллергенов может также зависеть и от особенностей их основного источника. Так, например, высокую значимость среди аллергенов клещей домашней пыли имеют пищеварительные ферменты, разнообразие которых зависит от характера питания клещей. В связи с этим, полученные из разных источников аллергены могут отличаться друг от друга и иметь разную диагностическую ценность для конкретного клинического случая.
Недостатки компонентной (молекулярной) аллергодиагностики
Компонентное исследование (Component-resolved diagnostics, CRD) – это современный метод определения уровня специфических иммуноглобулинов Е (sIgE) к отдельным компонентам (молекулам) нативных аллергенов. ImmunoCAP — новый иммунофлюоресцентный метод - наиболее стандартизированный метод диагностики аллергии in vitro. Современные технологии позволяют получить чистый аллергенный компонент с использованием методов генной инженерии. Использование рекомбинантных аллергенов позволяет выявить сенсибилизацию к отдельным компонентам нативного аллергена. При этом следует помнить, что рекомбинантные аллергокомпоненты полностью утрачивают «природную неоднородность» нативного аллергена. Кроме того, определение специфического иммуноглобулина Е имеет высокую степень погрешности, поскольку IgE относится к цитофильным антителам, основное расположение которых не в крови, а в тканях. По этой причине во многих случаях компонентное исследование специфических IgE не позволяет выявить аллергию.
Дополнительную информацию о методах аллергологического обследования Вы можете получить в рамках консультации врача аллерголога-иммунолога в клинике ВиТерра.